Western blot是一项在复杂样本中检测蛋白质表达水平的技术，至今已有超过40年的历史，并成为了蛋白质研究中最常用的工具之一。 WB流程一般是这样的：首先…
Continue Reading大肠表达中是否要去掉信号肽？
2019年9月25日 |
By annsci
信号肽的主要作用是促进蛋白质折叠成特定空间结构，同时它决定蛋白最终被定位到特定的亚细胞区。对于大多数大肠胞内表达模式来说，信号肽基本丧失了它的功能，同时信号肽的…
Continue Reading表达出来的蛋白比实际大小要小，这是为什么？
2019年9月25日 |
By annsci
主要原因有如下几个方面 蛋白本身被降解了，可以存在一些不利于该蛋白稳定的蛋白酶 翻译起始位点的问题：如果一个类似于核糖体结合位点(AAGGAGG)的序列加上适当…
Continue Reading表达的蛋白基本全是包涵体？
2019年9月25日 |
By annsci
使用野生型基因在大肠杆菌表达中形成包涵体的概率是很高的，为了减少包涵体的形成，文明建议大家采用基因合成的方式获得基因。同时在实验中，结合降低诱导温度，例如12-…
Continue Reading如何提高蛋白的可溶性表达比例及表达量？
2019年9月25日 |
By annsci
有些蛋白质表达水平低，或者表达的大多是包涵体，通常情况下通过基因优化，载体及菌株的筛选，表达条件优化，诱导条件优化等可以有效增加蛋白的可溶性比率及表达量。 1、…
Continue Reading大肠杆菌在表达蛋白过程中越来越少？
2019年9月25日 |
By annsci
主要可能有两种原因，一种是大肠在加入IPTG等诱导剂后大肠停止生长或者裂解，这时候我们要考虑蛋白本身对该菌是有一定毒性的，这时候我们可以选择一些采用严紧控制的宿…
Continue Reading用于表达蛋白的基因是钓取野生型还是通过基因合成获得？
2019年9月25日 |
By annsci
多数氨基酸都有一个以上的密码子，通过E.coli密码子应用情况的分析表明一些密码子很少被使用，尤其是Arg，IIE，Leu，Gly，Pro等氨基酸的部分密码子。…
Continue Reading如何获得关于我的蛋白的一些相关信息？
2019年9月25日 |
By annsci
生命科学发展在现在，很多蛋白质都已经被研究过了或者正在被研究，对于已有前人研究基础的蛋白质，我们可以借助NCBI和UniProt了解蛋白的结构及翻译后修饰等相关…
Continue ReadingHis 标签蛋白没有被洗脱下来
2019年9月20日 |
By annsci
a) 可能原因：洗脱条件太温和(组氨酸标记的蛋白质仍然结合在柱上，结合力较强) 解决方法：增加咪唑的梯度洗脱或降低pH 来找出最佳的洗脱条件。 b) 可能原因：…
Continue Reading蛋白定量有哪些方法？
2019年9月20日 |
By annsci
紫外检测法（紫外光谱吸收法）：色氨酸、酪氨酸的最大吸收峰在280nm附近，而大多数蛋白质含有这两种氨基酸残基，所以测定蛋白质溶液280nm的光吸收值可以快速简便…
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