双重免疫组化
一、实验原理
双重免疫组化是科研中的较好的一种免疫组化方法,其原理就是根据阳性表达部位和阳性表达区域不同所建立的一种直观的多色定位的染色方法。其标记的对象是两种或两种以上的细胞部位。主要标记部位如下:膜+浆型:膜+核型:浆+核型,切不可膜+膜,核+核,以免影响效果和颜色重叠。由于HRP和AEC显色系统的肉眼镜下颜色不同,所以直接抗原定位表达就非常直观了。
二、双重免疫组化的步骤
脱蜡水化–抗原修复–内源性封闭与阻断–抗体孵育–阳性信号检测–抗原热修复–第二个抗体孵育–阳性信号检测–脱水固定封片–图像采集与数据分析
三、双重染色的应用
1.用于区分常规HE染色下教难辨别的部位,例如,脉管系统中淋巴管道和 血管管腔无法肉眼区分。
2.恶性肿瘤的扩散显示。恶性肿瘤细胞的浸润在正常黏膜下呈慢性吞噬,如果对上皮和肿瘤细胞同时标记,可以更直接的观察渗透情况。
3.不同细胞在同一区域的分布情况
四、注意事项
1.玻片的处理 双重免疫组化步骤繁多,两次热修复对玻片涂胶要求较 高,以免脱片。
2.由于两种显色方法,颜色或许会发生重叠,所以对抗体的特异性雨效价要求较高。
五、送样要求
1)石蜡切片制片,组织取样后应立即放入固定液中,避免冻存;
2)冰冻切片制片应取用新鲜组织,以免抗原丢失;
3)组织蜡块可以保存很长时间,但是石蜡切片理论上不能超过半年。冰冻切片不能超过3个月
六、交付内容
检测结果(拍照图片)及详实的实验报告(含分析)
七、订购流程
八、订购方式
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