a) 可能原因：洗脱条件太温和(组氨酸标记的蛋白质仍然结合在柱上，结合力较强)

解决方法：增加咪唑的梯度洗脱或降低pH 来找出最佳的洗脱条件。

b) 可能原因：降低pH 的方法洗脱的，若pH 低于3.5，会导致镍离子脱落

解决方法：改变洗脱办法，咪唑竞争性洗脱

c) 可能原因：蛋白已沉淀在柱上

解决方法： 减少上样量，或使用咪唑的线性梯度而不是分步洗脱以降低蛋白的浓度。试用去污剂或改变NaCl 的浓度，或在变性条件( 去折叠) 下洗脱( 用4-8 M 脲，或4-6 M 盐酸胍)。

d) 可能原因：非特异性疏水或其他相互反应

解决方法: 加非离子去污剂到洗脱缓冲液(如：2% Triton X-100)或增加NaCl 的浓度。