免疫组化(单色)
一、实验原理
免疫组化(IHC)称为免疫组织化学技术(immunohistochemistry)或免疫细胞化学技术(immunocytochemistry),是应用抗原与抗体特异性结合的原理,通过酶标抗体与底物反应显色,从而对组织细胞内抗原进行定位、定性及定量的研究。免疫组化(IHC)具有特异性强、敏感度高、定位准确的优点。
二、免疫组化实验基本步骤
1.脱蜡水化:依次将切片放入二甲苯Ⅰ15min-二甲苯Ⅱ15min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-85%酒精5min-75%酒精5min-蒸馏水洗
2.抗原修复:组织切片置于盛满EDTA抗原修复缓冲液(PH8.0)的修复盒中于微波炉内进行抗原修复。中火8min停火8min转中低火7min,此过程中应防止缓冲液过度蒸发,切勿干片。自然冷却后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。(修复液和修复条件根据组织来确定)
3.内源性封闭与阻断:3%双氧水避光孵育25min后将玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。在圈内滴加BSA孵育30min。
4.抗体孵育:轻轻甩掉封闭液,在切片上滴加PBS按一定比例配好的一抗,切片平放于湿盒内4°C孵育过夜。(湿盒内加少量水防止抗体蒸发)一抗的稀释条件玻片置于PBS(PH7.4)中在脱色摇床上晃动洗涤3次,每次5min。切片稍甩干后在圈内滴加与一抗相应种属的二抗覆盖组织,避光室温孵育50min。PBS晃洗3次。
5.阳性信号检测:切片稍甩干后在圈内滴加DAB显色剂,显微镜控制显色。显色完全后,蒸馏水或自来水冲洗,苏木素复染,盐酸酒精分化氨水返蓝。
6.脱水固定封片:无水乙醇脱水,二甲苯透明中性树胶封固
7.图像采集与数据分析
三、送样要求
注意事项:
1)石蜡切片制片,组织取样后应立即放入固定液中,避免冻存;
2)冰冻切片制片应取用新鲜组织,以免抗原丢失;
3)组织蜡块可以保存很长时间,但是石蜡切片理论上不能超过半年。冰冻切片不能超过3个月
四、交付内容
检测结果(拍照图片)及详实的实验报告(含分析)
五、订购流程
六、订购方式
- 联系电话/微信:陈冰 15927118805
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