原核蛋白表达纯化定制实验服务
一、实验服务背景
原核蛋白表达是指通过基因克隆技术，将外源目的基因，通过构建表达载体并导入表达菌株的方法，使其在特定原核生物或细胞内表达。最常用的原核蛋白表达系统是大肠杆菌(Esherichia coli)表达系统，大肠杆菌表达系统具有许多优点，不仅遗传背景透彻、容易培养、基因工程操作简单且效率高、繁殖速度快、成本低，商品化表达载体种类齐全，而且外源蛋白表达水平高；基于以上特点，大肠杆菌仍然是目前应用最广泛的重组蛋白表达系统。
二、应用
大肠杆菌是表达重组蛋白最常用的宿主菌，已应用于许多具有重要蛋白的生产，包括作为抗原制备抗体、免疫实验、研究蛋白相互作用等。
三、服务内容及交付标准
包括基因合成、载体构建、表达小试及鉴定、大量表达纯化以及全套实验。
| 项目 | 分类 | |||
| 服务名称 | 内容 | 客户提供 | 交付结果 | 实验周期 |
| 基因合成 | 目标基因全基因合成 | 目标基因序列/氨基酸序列 | 基因合成产物，测序报告 | 1~2周 |
| 表达载体构建 | 1.扩增并抽提含有目的基因的克隆质粒。 2.将目的基因亚克隆到合适的表达质粒上。 3..测序验证构建质粒的准确性。 |
含目的基因的PCR产物/已连接克隆载体的质粒或菌液 | 重组质粒菌株，测序报告 | 1~2周 |
| 表达小试及鉴定 | 1. 扩增并抽提构建好的表达质粒。 2. 将表达质粒转入几种表达菌株中进行筛选。 3. 挑选多个阳性克隆选择合适的培养基进行扩增并选择合适的条件，SDS-PAGE检测蛋白表达情况，筛选出合适菌株。 |
客户已构建好的表达载体（需已做过转化和表达）/菌株 | 重组质粒的表达菌株及表达检测报告 | 4~6周 |
| 大量表达纯化 | 1. 对蛋白表达时间，温度以及IPTG浓度等表达条件进行优化，并诱导表达目的蛋白。 2. 摇瓶培养重组菌，通过亲和层析，离子交换，疏水及凝胶过滤等方法纯化表达的重组蛋白。 3. 利用蛋白酶去除不需要的纯化标签（可选，注：构建表达载体时需加入合适的蛋白酶切位点），再纯化获得所需的目的蛋白。 4. 通过SDS-PAGE电泳检测每步结果并控制最终产品质量。 5. .通过Western-blot验证目标蛋白正确性。 |
客户已构建好的表达载体（需已做过转化和表达）/菌株 | ≥1mg纯化好的目的蛋白（可按客户要求提供含纯化标签或去除纯化标签的目的蛋白，纯度最高可达95%以上） 项目服务报告（包括表达条件、蛋白纯化报告以及每一步的SDS-PAGE图谱） |
4~6周 |
四、原核蛋白表达纯化交付实例
五、订购流程
六、订购方式
- 联系电话/微信：陈冰 15927118805
- 技术支持邮箱：wendy.wang@annsci.com
- 信息接收邮箱：service@annsci.com
- 在线联系：点击“在线客户“进行询问
七、相关服务推荐
- 真核蛋白表达纯化
- 多肽合成
- 抗体定制
- 偶联标记